Aislamiento e identificación molecular de trichoderma spp.

Abstract

Trichoderma es un tipo de hongo anaerobio facultativo que se encuentra de manera natural en un número importante de suelos agrícolas y otros tipos de medios como la madera decadente. El estudio se realizó con el objetivo de identificar las cepas de este hongo presentes en muestras de suelos agrícolas de diferentes localidades del Ecuador por métodos morfológicos y moleculares. La propagación de los aislados una vez purificados se realizó en los medios de cultivo Papa Dextrosa Agar (PDA) y agar bajo en nutrientes (SNA), a una temperatura entre 25 - 28ºC. Se procedió a la medición de la tasa de crecimiento de los aislamientos puros y por medio de tinción con azul de metileno se determinó la diferenciación de especies de Trichoderma, incluyendo la características de la cepa como tamaño de estructuras (conidias, fiálides, clamidosporos y ramificación de los conidióforos). Asimismo, se usaron técnicas moleculares que incluyeron el análisis del ADN ribosomal (ADNr), revelando diferencias relevantes en la región del ITS1 (espaciador transcrito interno 1) entre las cepas analizadas. Se utilizaron los iniciadores ITSx, ITSy, y el producto de PCR fue cortado con la enzima MboI, evidenciando la presencia de dos secciones del hongo (Pachybasium y Trichoderma) entre las cepas estudiadas. De igual manera, se utilizaron los iniciadores universales L45, L15/AS19 y AS15inv para la técnica UP-PCR. Los análisis fenotípicos (crecimiento y morfología) evidenciaron características distinguibles entre las cepas de Trichoderma indicando la presencia de dos especies T. harzianum y T. viride. Los análisis moleculares concordaron con las clasificación de los análisis fenotípicas y además se determino que las cepas pertenecientes a T. harzianum y T. viride corresponden a las secciones Pachybasium y Trichoderma, respectivamente.