Abstract:
Ecuador es el primer exportador de banano a nivel mundial, por lo que es
indispensable encontrar vías de mejoramiento de variedades comerciales y
locales para reducir pérdidas en la producción como las causadas por la
Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet). Uno de los métodos para
la mejora de variedades en banano, es la transformación genética como una
alternativa al mejoramiento genético convencional. Un programa de mejora
convencional de banano es muy dificultoso debido a los altos niveles de
esterilidad, necesidad de cruzamientos interploidales, baja proporción de
germinación de semillas y a un largo ciclo de cultivo. La ingeniería genética
es una alternativa al mejoramiento convencional y ofrece a los
fitomejoradores la oportunidad de superar las limitaciones impuestas por la
esterilidad en la mayoría de los cultivares de banano. En el Ecuador, no
existen programas de mejoramiento genético en banano usando
herramientas de la biotecnología moderna como la trasformación genética.
Para realizar la implementación de mejora genética de banano mediante la
ingeniería genética se deben estandarizar protocolos de transformación. El objetivo principal de este trabajo fue la estandarización del protocolo de
modificación genética en banano mediante el uso del organismo
Agrobacterium tumefaciens. La transferencia de genes fue realizada a través
del co-cultivo de suspensiones de células embriogénicas del cultivar de
banano ‘Williams’ con la cepa de Agrobacterium tumefaciens EHA105. Los
plásmidos usados para la transformación fueron el pCAMBIA1301 (promotor
35S del virus del mosaico de la coliflor expresando el gen reportero uidAINT),
el pESKUL1 y el pESKUL7 los cuales contienen distintos promotores de
banano que expresan al gen reportero uidAINT. El ensayo de expresión
temporal en células de banano transformadas genéticamente después de
siete días de co-cultivo con Agrobacterium tumefaciens mostró que desde
12, 26 y hasta 246 puntos azules se encontraron en las células
transformadas con los plásmidos pESKUL1, pESKUL7, y el pCAMBIA1301,
respectivamente. La concentración óptima del antibiótico higromicina fue
probada para la selección de colonias de células transgénicas. Las
concentraciones óptimas de higromicina oscilan entre 12.5 y 20 Qg mL-1. Un
protocolo estandarizado para la transformación genética de banano fue
desarrollado, formando las bases biotecnológicas para la generación de
plantas de banano resistentes a enfermedades por primera vez en el
Ecuador.
