Diseño de un sistema de detección RT-PCR múltiplex para virus de Carica papaya

Abstract

El cultivo de papaya (Carica papaya) en Ecuador se encuentra focalizado en Guayas, Manabí y Los Ríos. Ecuador ocupa el octavo lugar entre los países productores de papaya en Latinoamérica, sin embargo, no se ha potenciado la producción de esta fruta debido a problemas fitosanitarios como hongos y virus. Debido a la naturaleza biológica de los virus, las plantas infectadas deben ser eliminadas para evitar la propagación del agente microbiano en el cultivo. Por estas razones, se requiere constantemente de métodos de detección de virus confiables y asequible. Este proyecto consiste en el diseño y aplicación de un sistema de detección mediante RTPCR múltiplex a partir de ARN total obtenido de C. papaya. El desarrollo del sistema se llevó a cabo a través de la técnica de RT-PCR, cuyo protocolo fue optimizado para obtener un mejor rendimiento. Como resultado principal, obtuvimos dos tríplex (PpVQ, PSFaV, ndhB y PpVE, PRSV, ndhB) cuya detección se logra hasta en 10-1 de la muestra diluida. Asimismo, se diseñaron cebadores (iniciador y terminador) con un alto nivel de especificidad y se logró validar la funcionalidad del protocolo modificado para la obtención del sistema multiplex. De esta forma, el desarrollo de los tríplex permite la optimización del uso de reactivos, enzimas y buffers en el diagnóstico de enfermedades virales, así como la reducción de los desechos de laboratorio generados a partir de pruebas de diagnóstico.