Resumen:
CONDITION FOR PUBLICATION OF PROJECT. This study aims to validate an analytical method for the quantitative determination of polyphenols and flavonoids in plant extracts using Ultra High Performance Liquid chromatography (UPLC) with a diode array detector (DAD). This research is due Ecuador's need to characterize natural bioactive compounds due to its vast biodiversity. The analytical method was developed and validated for the simultaneous separation and quantification of nine target analytes: gallic acid, chlorogenic acid, caffeic acid, syringic acid, p-coumaric acid, rutin, quercetin, naringenin, and kaempferol. The method validation included the assessment of specificity, linearity, precision, accuracy, limit of detection (LOD), and limit of quantification (LOQ) according to the requirements of the ICH standard.
The results demonstrated that the method is linear within the working range of 0.5 mg/L–3.0 mg/L, selective, and reproducible, with correlation coefficients above 0.99 in calibration curves and adequate chromatographic resolution for the separation of the analyzed compounds. A recovery rate between 90% and 110% was observed, confirming its precision and applicability in the quantification of polyphenols in plant matrices. This study contributes to the development of reliable techniques for evaluating bioactive compounds in natural matrices.
Keywords: Validation, polyphenols, flavonoids, UPLC.
Descripción:
CONDICIONAMIENTO DE PUBLICACION DE PROYECTO. Este trabajo tiene como objetivo la validación de un método analítico para la determinación cuantitativa de polifenoles y flavonoides en extractos vegetales, utilizando cromatografía líquida de ultra alta eficiencia (UPLC) con detector de arreglo de diodos (DAD). Este estudio se enmarca en la necesidad que presenta el Ecuador debido a su gran biodiversidad de caracterizar biocompuestos naturales según su potencial bioactivo. El método analítico fue desarrollado y validado para la separación y cuantificación simultánea de nueve analitos de interés: ácido gálico, ácido clorogénico, ácido cafeico, ácido siríngico, ácido p-cumárico, rutina, quercetina, naringenina y kaempferol. La validación del método incluyó la evaluación de especificidad, linealidad, precisión, exactitud, límite de detección (LOD) y límite de cuantificación (LOQ) según los requisitos basados en la guía de validación ICH. Los resultados obtenidos demostraron que el método es lineal dentro del rango de trabajo 0,5 mg/l-3,0 mg/l, es selectivo y reproducible, con coeficientes de correlación superiores a 0.99 en las curvas de calibración y una resolución cromatográfica adecuada para la separación de los compuestos analizados. Se observó una recuperación entre 90-110%, confirmando su precisión y aplicabilidad en la cuantificación de polifenoles en matrices vegetales. Este estudio contribuye al desarrollo de técnicas confiables para la evaluación de biocompuestos en matrices naturales.
