Identificación molecular de comunidades bacterianas Gram negativas en agua de un sistema de pre-criadero de Litopenaeus vannamei

Abstract

El presente trabajo se basó en la caracterización molecular de bacterias Gram negativas a través de la subunidad 16s rRNA que están presentes en el agua obtenida de un sistema de pre criadero de la camaronera ARGESA en el sector de Balao grande. La propuesta de este proyecto fue conocer la diversidad bacteriana y asociar la presencia de estos organismos a la salud de las post larvas de camarones comparándolo con investigaciones anteriores. Las muestras de agua tomadas de los pre criaderos siguiendo el plan de muestreo en Z fueron transportadas al laboratorio en hielo para su análisis. Una vez realizada la extracción y purificación de ADN total se procedió a la amplificación por PCR utilizando los primers universales RW01 (5′-AAC TGG AGG AAG GTG GGG AT-3′) y DG74 (5′-AGG AGG TGA TCC AAC CGC A- 3′) con el cual obtendremos el ADN bacteriano total. Se realizó una segunda amplificación por PCR a partir del producto obtenido de la primera amplificación utilizando los primers DG74 (5′-AGG AGG TGA TCC AAC CGC A-3′) y 68d (5′-AYGACGTCAAGTCMTCATGG-3′), este último es un primer especifico para bacterias Gram negativas. Con esta segunda PCR obtuvimos el ADN bacteriano total especifico para proceder con la secuenciación. Los resultados de la secuenciación fueron alineados con secuencias existentes en el gen Bank en donde se identificaron los géneros Vibrios, Pseudomonas, Aeromonas, Plesiomonas, Flavobacterium, Klebsiella, Serratia, Shewanella y Xanthomonas. También se comprobó la existencias de V. harveyi, V. parahaemolyticus y V. vulnificus que causan enfermedades en los laboratorios de larvas de camarón. Otras de las especies del género Vibrio encontradas fueron V. alginolyticus, V. fluvialis, V. campbelli, V. fischeri, V. damsela, V. anguillarum, V. gazogenes, V. mimicus, V. proteolyticus, V. splendidus, V. nereis, V. hollisae, V. pelagius, V. natriegens, V cincinnattiensis, V. cholerae, V. metschikovii, V. furnissii, V. carchirae