Diseño de Minigenoma de Virus Rabico como base para Formulación de Vacunas de Nueva Generacion

Abstract

La rabia es una infección vírica mortal, de enorme trascendencia para la salud pública ecuatoriana por las altas tasas de mortalidad observadas en años anteriores. Los cánidos constituyen la principal fuente de transmisión al hombre en zonas urbanas, mientras que en las zonas rurales se suman diferentes especies de animales silvestres, entre los cuales predominan los quirópteros como fuente de transmisión a otros mamíferos incluido humanos. La rabia constituye un serio problema sanitario en razón de la alta letalidad; demanda además una considerable inversión económica y recursos humanos para actividades de control y prevención. La importancia de estudiar este virus radica en la prevención y la elaboración de nuevas herramientas que nos permitan un mejor control de futuros brotes de la enfermedad. Con esta finalidad el presente trabajo describe la implementación de un sistema de replicación artificial del virus de la rabia, utilizando principios de genética reversa y técnicas de clonación molecular. Dicho sistema permitirá estudiar procesos bilógicos e inmunológicos bajo condiciones in vitro. El correcto funcionamiento del sistema artificial se comprobó mediante la expresión de un minigenoma, el cual es un ARN de menor tamaño que el genoma viral completo, pero que contiene la información genética suficiente para replicarse, proveyendo las proteínas virales necesarias paralelamente. El minigenoma se construyó reemplazando todos los genes estructurales del virus por el gen que codifica la proteína verde fluorescente (eGFP, siglas en inglés), como gen reportero. Su actividad se determinó por fluorescencia en un cultivo de células de riñón de mamífero, después de 72 horas de transfección. Los resultados obtenidos, con sus respectivos controles, demuestran que el sistema fue exitoso al transcribir y expresar el gen reportero del minigenoma rábico. Estos resultados servirán de base para la elaboración de un genoma completo del virus de la rabia que pueda ser recuperado in vitro.