Abstract:
CONDITION FOR PUBLICATION OF PROJECT. In recent years, global pitahaya production has increased significantly. However, despite the numerous social, nutritional, and economic benefits it offers, few molecular characterization studies have been conducted on its productivity, quality, and/or pathogen resistance. This project aims to construct infectious clones based on the cactus carlavirus 2 (CCV-2) genome, with potential applications in the study of gene expression and pathogen control in pitahaya (Hylocereus spp.). CCV-2 fragments were designed in silico at Twist Bioscience and Geneious Prime and assembled using the Golden Gate system. This construct was inserted into E. coli and A. tumefaciens and subsequently inoculated into Hylocereus spp. (n=12) by agroinfiltration (i) with a syringe (ii) by bevel cut, and their infection was evaluated at 30, 60, and 90 days post-transfection by RT-PCR. The viral construct was found to be 20% infectious in Hylocereus spp. This study represents a promising tool for viral biology and functional genomics studies in non-model crops such as pitahaya.
Keywords: carlavirus, viral construct, agroinfiltration, functional genomics
Description:
CONDICIONAMIENTO DE PUBLICACION DE PROYECTO. En los últimos años, la producción mundial de pitahaya ha incrementado significativamente. Sin embargo, a pesar de los números beneficios sociales, nutricionales y económicos que posee, existen pocos estudios de caracterización molecular relacionados a su productividad, calidad y/o resistencia a patógenos. El presente proyecto tiene como objetivo construir clones infecciosos basados en el genoma del cactus carlavirus 2 (CCV-2), con aplicaciones potenciales en el estudio de la expresión génica y el control de patógenos en pitahaya (Hylocereus spp.). Los fragmentos de CCV-2 se diseñaron in silico en Twist Bioscience y Geneious Prime, y fueron ensamblados con el sistema Golden Gate. Dicho constructo fue insertado en E. coli y A. tumefaciens para posteriormente ser inoculado en Hylocereus spp. (n=12) mediante agroinfiltración i) con jeringa ii) corte en bísel, evaluando su infección a los 30, 60 y 90 días post-trasnfección por RT-PCR. El constructo viral resultó ser infeccioso en un 20% en Hylocereus spp. El estudio representa una herramienta prometedora para estudios de biología viral y genómica funcional en cultivos no modelo como la pitahaya.
