Implementación del diagnóstico de los serotipos del virus del dengue mediante PCR con transcriptasa inversa en tiempo real (RT-qPCR)

Abstract

El dengue es una de las enfermedades transmitidas por vectores con gran número de casos alrededor del mundo. Se divide en cuatro serotipos, con una variación del 30% del genoma entre ellos y cada uno exhibe en mayor proporción síntomas propios del dengue. Pruebas de antígenos o anticuerpos para detección de dengue no pueden discernir serotipos y presentan deficiente sensibilidad en diagnóstico temprano. Pruebas moleculares superan estas barreras, sin embargo, son altamente costosas. Por ello, ¿Es posible implementar un método costo-efectivo para la detección de serotipos virales?. El objetivo del proyecto es desarrollar un protocolo estandarizado de serotipado de dengue (I-IV) basado en multiplex de PCR tiempo real (RT-qPCR) para implementación de paneles de diagnóstico local y seguimiento epidemiológico. Se realizó análisis bioinformático de iniciadores y sondas de los serotipos, así como pruebas de optimización y calibración de RT-qPCR para diagnóstico de serotipos en una sola reacción. La PCR multiplex de tres serotipos (I, II y IV) demostró la misma sensibilidad y especificidad que se obtendría con sus respectivas detecciones individuales. El enfoque multiplex supone un ahorro para el análisis de 32 muestras, resultando en $64,2mientras la detección individual supone un gasto de $181,19. Los resultados de calibración y optimización de PCR multiplex, junto al análisis económico indican que el protocolo empleado obtuvo una prueba costo –efectiva para la detección de serotipos virales, cuyos lineamientos y normas se pueden extender para PCR multiplex de otros virus.